FluoLysoTM Red(溶酶体红色荧光探针) 货号: L4086S/L4086L 规格: 50 μL/10 × 50 μL

FluoLysoTM Red(溶酶体红色荧光探针)

产品货号: L4086S/L4086L

产品规格: 50 μL/10 × 50 μL

目录价(元):458/2688

推荐仪器:荧光显微镜

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产品概述:

货号

名称

Absmax/Em

规格

L4085S

FluoLysoTM Green(溶酶体绿色荧光探针)

504/511

50 μL

L4085L

10×50 μL

L4086S

FluoLysoTM Red(溶酶体红色荧光探针)

577/590

50 μL

L4086L

10×50 μL

L4087S

FluoLysoTM Deep Red(溶酶体深红色荧光探针)

649/665

50 μL

L4087L

10×50 μL


储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。

产品介绍

FluoLysoTM 探针是一种用于活细胞溶酶体特异性标记的荧光探针,本品浓度为1 mM。FluoLysoTM探针可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中,从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。FluoLysoTM探针适用于活细胞染色,但不适合用于固定后细胞的染色。

注意事项
1. 如果染色效果欠佳,可以提高染色工作液中FluoLysoTM 探针的浓度,或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。
2. 为了降低染色背景,尽可能的使用较低浓度的染料。
3. 注意拍照要迅速,因为染料随着拍照时间的增加易淬灭。


说明书:

FluoLysoTM Red(溶酶体红色荧光探针) 货号:               L4086S/L4086L  规格:               50 μL/10  × 50 μL L4086S/L4086L    
MSDS:

MSDS FluoLysoTM Probes
使用本产品的文献:

1.A metalloprotein nanoparticle scaffold co-delivers antigens and adjuvants with metal-enhanced STING activation for vaccination preventing viral infections

Jiexin Li a , QianQiu a ,HeRen a ,JingyuZhanga , ChenZhang a , Gengqi Liu a , Boyang Sun a ,Bin Zhengb, JonathanF.Lovellc ,YumiaoZhang     https://doi.org/10.1016/j.nantod.2024.102156

应用方向:细胞结构染色

YO425 SE(YO425琥珀酰亚胺酯) 货号: YS0093 规格: 1 mg

YO425 SE(YO425琥珀酰亚胺酯)

产品货号: YS0093

产品规格: 1 mg

目录价(元):1800

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产品概述:

产品货号:

货号

名称

外观颜色

Absmax/Em

(nm)

A280/Amax

or Cf (protein)

Extinction coefficient(ε)

Optimal DOL(IgG)

MW

YS0093

YO425 SEYO425 琥珀酰亚胺酯)

淡黄色

429/475

0.17

45,000

2-3

526.6

YS0087

YO565 SEYO565琥珀酰亚胺酯)

红色

563/594

0.12

120,000

2-3

607.7

名称

光谱图

(溶解于DMSO中所测)

效能等同于

YO425 SEYO425 琥珀酰亚胺酯)

YO425 SE(YO425琥珀酰亚胺酯) 货号:               YS0093  规格:               1 mg

ATTO 425 NHS-ester

YO565 SEYO565琥珀酰亚胺酯)

YO425 SE(YO425琥珀酰亚胺酯) 货号:               YS0093  规格:               1 mg

ATTO 565 NHS-ester

储存条件
-20避光保存,有效期见外包装

产品介绍

UElandy提供多种性价比高的氨基反应染料,用于标记蛋白质和其他含胺化合物。YO Dye SE可以与氨基基团反应生成稳定的酰胺键。

注意事项
1. 荧光染料激发与发射波长会受到溶剂的影响,使用不同溶剂,则激发与发射波长可能会发生变化。
2. 标记的蛋白如需储存,可以添加终浓度为2 mM NaN3作为防腐剂,放置于4℃避光保存。如需长期储存,请将溶液分成小份并在 -20℃ 下冷冻,避免反复冻融,尽可能保护染料偶联物免受光照。
3. 操作过程注意避光,避免产生气泡。
4. 层析柱装柱时,尽量使柱体均匀,柱面平整,无气泡、裂隙。
5. 上样时注意,当柱顶缓冲液与凝胶平面相切时再加样品,洗脱时,当样品走至与凝胶平面相切时再加洗脱液。
6. 影响标记效率的其他因素还包括:温度、反应时间、pH、荧光染料与蛋白的量等,需注意控制。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套。


说明书:

YO425 SE(YO425琥珀酰亚胺酯) 货号:               YS0093  规格:               1 mg YS0093    
MSDS:

MSDS YO Dye SE

YO565 SE(YO565琥珀酰亚胺酯) 货号: YS0087 规格: 1mg

YO565 SE(YO565琥珀酰亚胺酯)

产品货号: YS0087

产品规格: 1mg

目录价(元):1800

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产品概述:

产品货号:

货号

名称

外观颜色

Absmax/Em

(nm)

A280/Amax

or C(protein)

Extinction coefficient(ε)

Optimal DOL(IgG)

MW

YS0093

YO425 SEYO425 琥珀酰亚胺酯)

淡黄色

429/475

0.17

45,000

2-3

526.6

YS0087

YO565 SEYO565琥珀酰亚胺酯)

红色

563/594

0.12

120,000

2-3

607.7

名称

光谱图

(溶解于DMSO中所测)

效能等同于

YO425 SEYO425 琥珀酰亚胺酯)

YO565 SE(YO565琥珀酰亚胺酯) 货号:               YS0087  规格:               1mg

ATTO 425 NHS-ester

YO565 SEYO565琥珀酰亚胺酯)

YO565 SE(YO565琥珀酰亚胺酯) 货号:               YS0087  规格:               1mg

ATTO 565 NHS-ester

储存条件
-20避光保存,有效期见外包装

产品介绍

UElandy提供多种性价比高的氨基反应染料,用于标记蛋白质和其他含胺化合物。YO Dye SE可以与氨基基团反应生成稳定的酰胺键。

注意事项
1. 荧光染料激发与发射波长会受到溶剂的影响,使用不同溶剂,则激发与发射波长可能会发生变化。
2. 标记的蛋白如需储存,可以添加终浓度为2 mM NaN3作为防腐剂,放置于4℃避光保存。如需长期储存,请将溶液分成小份并在 -20℃ 下冷冻,避免反复冻融,尽可能保护染料偶联物免受光照。
3. 操作过程注意避光,避免产生气泡。
4. 层析柱装柱时,尽量使柱体均匀,柱面平整,无气泡、裂隙。
5. 上样时注意,当柱顶缓冲液与凝胶平面相切时再加样品,洗脱时,当样品走至与凝胶平面相切时再加洗脱液。
6. 影响标记效率的其他因素还包括:温度、反应时间、pH、荧光染料与蛋白的量等,需注意控制。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套。


说明书:

YO565 SE(YO565琥珀酰亚胺酯) 货号:               YS0087  规格:               1mg YS0087    
MSDS:

MSDS YO Dye SE

FluoLysoTM Deep Red(溶酶体深红色荧光探针) 货号: L4087S/L4087L 规格: 50 μL/10×50 μL

FluoLysoTM Deep Red(溶酶体深红色荧光探针)

产品货号: L4087S/L4087L

产品规格: 50 μL/10×50 μL

目录价(元):628/3688

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产品概述:

货号

名称

Absmax/Em

规格

L4085S

FluoLysoTM Green(溶酶体绿色荧光探针)

504/511

50 μL

L4085L

10×50 μL

L4086S

FluoLysoTM Red(溶酶体红色荧光探针)

577/590

50 μL

L4086L

10×50 μL

L4087S

FluoLysoTM Deep Red(溶酶体深红色荧光探针)

649/665

50 μL

L4087L

10×50 μL


储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。

产品介绍

FluoLysoTM 探针是一种用于活细胞溶酶体特异性标记的荧光探针,本品浓度为1 mM。FluoLysoTM探针可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中,从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。FluoLysoTM探针适用于活细胞染色,但不适合用于固定后细胞的染色。

注意事项
1. 如果染色效果欠佳,可以提高染色工作液中FluoLysoTM 探针的浓度,或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。
2. 为了降低染色背景,尽可能的使用较低浓度的染料。
3. 注意拍照要迅速,因为染料随着拍照时间的增加易淬灭。


说明书:

FluoLysoTM Deep Red(溶酶体深红色荧光探针) 货号:               L4087S/L4087L  规格:               50 μL/10×50 μL L4087S/L4087L    
MSDS:

MSDS FluoLysoTM Probes

YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6002S/Y6002M/Y6002L 规格: 10T/50T/100T

YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: Y6002S/Y6002M/Y6002L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):281/1061/1591

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

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产品概述:

产品内容:

            规格

组分                  

  Y6002S10T

 Y6002M50T

 Y6002L100T

  A. 1× Annexin V 结合缓冲液

  10 mL

  50 mL

  50 mL×2

B. YF®488-Annexin V

  50 μL

  250 μL

  500 μL

C. PI

  100 μL

  500 μL

  1 mL


储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
YF®488-Annexin V: Ex/Em = 490/515 nm
PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

产品介绍

YF®488-Annexin V和PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(绿色)和坏死或晚期凋亡的细胞(红色),用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为 35-36KD的 Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用绿色荧光探针 YF®488 标记的 Annexin V,即 YF®488-Annexin V,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,YF®488-Annexin V则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的 PS 结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种 DNA 结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488,532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。

注意事项
1.使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2.为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3.由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4.对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 YF®488-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5.贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6.为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6002S/Y6002M/Y6002L  规格:               10T/50T/100T Y6002S/Y6002M/Y6002L    
MSDS:

MSDS Y6002 YF®488-Annexin V&PI
客户使用反馈:


常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6002S/Y6002M/Y6002L  规格:               10T/50T/100T

假阳性问题?
1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

 圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6002S/Y6002M/Y6002L  规格:               10T/50T/100TYF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6002S/Y6002M/Y6002L  规格:               10T/50T/100T

免疫染色与凋亡染色顺序问题?

Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。


使用本产品的文献:

1.Iron Accumulation Leads to Bone Loss by Inducing Mesenchymal Stem Cell Apoptosis Through the Activation of Caspase3
Ye YuanFei XuYan CaoLi XuChen YuFan YangPeng ZhangLiang WangGuangsi ShenJianrong WangYoujia Xu
Biological Trace Element Research(2018) 434–441
应用方向:流式细胞仪检测:骨髓间充质干细胞的凋亡

2.
铁蓄积诱导间充质干细胞凋亡并抑制成骨活性的研究
袁晔, 张鹏王亮, 徐非, 俞晨, 杨帆, 张辉, 易剑桥, 徐又佳
中华实验外科杂志 (2017) 1839-1842 
应用方向:流式细胞仪检测:骨髓间充质干细胞(BMSCs)的凋亡

3.Near-infrared upconversion–activated CRISPR-Cas9 system: A remote-controlled gene editing platform
Yongchun Pan, Jingjing Yang, Xiaowei Luan, Xinli Liu, XUEqing Li, Jian Yang, Ting Huang, Lu Sun, Yuzhen Wang.
Science Advances(2019)
应用方向:流式细胞仪检测:A549细胞的凋亡

4.外泌体介导乳腺癌 MCF-7 细胞对多柔比星耐药性的机制
张如月; 李朵璐; 杨哲; 郭金秀; 周玉冰
药学学报(2019)
应用方向:荧光显微镜凋亡检测:MCF-7、MCF-7/Exo、MCF-7/Dox细胞的凋亡

5.MS-275联合顺铂对食管鳞状细胞癌9706细胞氧化损伤和凋亡的影响
刘腾飞,王亚苹,李亚,张振坤,李喆,周馨魁,张璐玉,王文杰,刘红涛,张彦婷,关方霞,马珊珊
郑州大学生命科学学院
应用方向:流式细胞仪检测:食管鳞状细胞癌(鳞癌) EC9706细胞的凋亡

6.MS-275 combined with cisplatin exerts synergistic antitumor effects in human esophageal squamous cell carcinoma cells
Tengfei Liu,Fangxia Guan,Yaping Wang,Zhenkun Zhang,Ya Li,Yuanbo Cui,Zhe Li,Hongtao Liu,Yanting Zhang,Yuming Wang,Shanshan Ma
Toxicology and Applied Pharmacology Volume 395, 15 May 2020, 114971

7.Deformable liposomal codelivery of vorinostat and simvastatin promotes antitumor responses through remodeling tumor microenvironment
Bin Tu,Yang He,Binfan Chen,Yonghui Wang,Yanrong Gao,Mingjie Shi,Tuanbing Liu,Akmal M. Asrorov,Yongzhuo Huang
Biomaterials Science

8.Effective Genome Editing Using CRISPR-Cas9 Nanoflowers
Chen Zhang He Ren Gengqi Liu Jiexin Li Xiaojie Wang Yumiao Zhang 
Advanced Healthcare Materials

FluoLysoTM Green(溶酶体绿色荧光探针) 货号: L4085S/L4085L 规格: 50 μL/10 × 50 μL

FluoLysoTM Green(溶酶体绿色荧光探针)

产品货号: L4085S/L4085L

产品规格: 50 μL/10 × 50 μL

目录价(元):458/2688

推荐仪器:荧光显微镜

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产品概述:

货号

名称

Absmax/Em

规格

L4085S

FluoLysoTM Green(溶酶体绿色荧光探针)

504/511

50 μL

L4085L

10×50 μL

L4086S

FluoLysoTM Red(溶酶体红色荧光探针)

577/590

50 μL

L4086L

10×50 μL

L4087S

FluoLysoTM Deep Red(溶酶体深红色荧光探针)

649/665

50 μL

L4087L

10×50 μL


储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。

产品介绍

FluoLysoTM 探针是一种用于活细胞溶酶体特异性标记的荧光探针,本品浓度为1 mM。FluoLysoTM探针可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中,从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。FluoLysoTM探针适用于活细胞染色,但不适合用于固定后细胞的染色。

注意事项

1. 如果染色效果欠佳,可以提高染色工作液中FluoLysoTM 探针的浓度,或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。
2. 为了降低染色背景,尽可能的使用较低浓度的染料。
3. 注意拍照要迅速,因为染料随着拍照时间的增加易淬灭。


说明书:

FluoLysoTM Green(溶酶体绿色荧光探针) 货号:               L4085S/L4085L  规格:               50 μL/10  × 50 μL L4085S/L4085L    
MSDS:

MSDS FluoLysoTM Probes

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6026S/Y6026M/Y6026L 规格: 10T/50T/100T

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: Y6026S/Y6026M/Y6026L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):317/1194/1769

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

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产品概述:

储存条件
4℃ 避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。 

组分                   

规格

 Y6026S10T

 Y6026M50T

 Y6026L100T

A. 1×Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. YF®647A-Annexin V

50 μL

250 μL

500 μL

C. PI

100 μL

500 μL

1 mL


储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
YF®647A-Annexin V:Ex/Em = 650/665 nm
PI:Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

产品介绍

YF®647A-Annexin V和PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(远红)和坏死或晚期凋亡的细胞(红色),用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用远红荧光探针YF®647A标记的Annexin V,即YF®647A-Annexin V,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,YF®647A-Annexin V则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的PS结合,从而也使坏死细胞呈现远红外荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种DNA结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488,532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。

注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4. 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 YF®647A-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100T UE-Y6026S/Y6026M/Y6026L    
MSDS:

MSDS Y6026 YF®647A-Annexin V and PI Apoptosis Kit
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100TYF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100T

免疫染色与凋亡染色顺序问题?

Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。